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固定是組織處理過程中重要的環(huán)節(jié),也是在整個(gè)制片過程中無(wú)法補(bǔ)救的一步,如果因固定不及時(shí)或固定液量不足而導(dǎo)致組織細(xì)胞的自溶,這一過程是無(wú)法逆轉(zhuǎn)的,因此固定是決定了病理實(shí)驗(yàn)(冰凍切片實(shí)驗(yàn)除外)是否成功的關(guān)鍵因素。
抑制細(xì)菌繁殖所致的腐敗。
對(duì)組織具有硬化作用,有利于切片。柔軟組織(如腦)的質(zhì)地變硬易于操作。
組織離體后盡量能馬上固定,至少也要保證在30分鐘內(nèi)固定。
固定液濃度需準(zhǔn)確,過稀或過濃都會(huì)影響組織的形態(tài)和固定效果。
室溫或37℃。溫度過高,加快組織的收縮和細(xì)胞自溶;溫度過低,延緩固定液滲透速度,需增加固定時(shí)長(zhǎng)。
24h~72h,如果溫度太低或者組織過大,需要適當(dāng)延長(zhǎng)固定時(shí)間。如果是做RNA原位雜交項(xiàng)目,固定時(shí)間不要超過72h。
不大于1cm*1cm*0.5cm。厚度2~3mm,不要超過5mm。